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1、小牛血清和胎牛血清有何区别？应用注意事项？
来源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛（小牛）血清（Calf serum, CS）采自出生10至14天的小牛。
组份与比例不同：两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。
血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。

2、胰酶消化传代的浓度是多少？是否含EDTA？浓度？
胰酶消化传代的一般浓度为0.25%，部分细胞由于贴壁较紧，需要加0.53mM的EDTA，如果做原代培养，胰酶的浓度需要做适当的提高。

3、常用细胞株推荐的培养基及特殊要求？
常规培养基的选用一般原则，悬浮培养细胞以RPMI1640为主、贴壁培养的细胞以DMEM为主，部分细胞需用特殊培养液来培养，如Mccoy’5A、L-15、F12K、D+F12 等等。

4、细胞株的污染鉴定、预防和处理问题。
普通微生物污染：培养基浑浊，高倍镜观察有微生物污染；按规定弃用并全面严格灭菌。
支原体污染：显微镜无法观察，依经验表现为细胞生长缓慢，有细胞漂浮等等，应通过PCR等方法鉴定，如发现支原体污染，应按规定弃用，实验室要及时全面消毒灭菌，防止蔓延。（有些常规性细胞学实验不受支原体污染影响，可以继续使用细胞传代，为防污染扩大蔓延，可以选择性的在培养基中加入高效价的其它种抗生素，并在隔离实验室操作和独立使用一切用具与培养基等）。

5、如何传代贴壁细胞？
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化贴壁细胞成单个细胞，也可加入乙二胺四乙酸（EDTA）提高消化能力，EDTA 是一种二价离子的螯合剂，能抑制细胞膜上的Ca²⁺和Mg²⁺。常用的细胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA，一般用不含Ca²⁺和Mg²⁺的盐溶液配置，先用胰酶-EDTA消化液清洗细胞（5.0-10.0ml/75cm），然后弃去消化液，重新加入少量的胰酶-EDTA消化液(2.0 to 5.0ml/75 sq. cm flask)，观察细胞直到细胞变圆脱离瓶壁，此过程一般需要5-15分钟，为了避免细胞成团，消化细胞的过程中不要拍打细胞瓶。对于特别难消化的细胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把细胞置于37℃促进消化，细胞脱离瓶壁后，立刻加入含有血清的完全培养基中止消化，血清中某些蛋白质能够抑制胰酶的活性。一般情况下，离心并不需要。如果细胞需要无血清或者低血清的培养基，可以以125000g转速离心5分钟，然后弃去中止用的培养基，加入适合的新的培养基轻轻混匀细胞，移入到新的培养瓶。传代的比例视细胞类型而定，一般是1:2-1:20，具体比例可参考说明书。胰蛋白酶会对某些细胞的细胞膜产生损伤，对于这种类型的细胞，可用细胞刮轻轻刮下细胞，加入适量的培养基，轻轻吹打混匀细胞，然后进行传代培养。