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6、传代细胞的频率多久较合适？
传代是指把细胞从一个培养瓶移到另一个培养瓶，传代的间隔是指两次传代之间的时间。贴壁型的细胞的汇合度达到或者接近100%的时候，需进行传代操作，但是，有些细胞以克隆的形式生长，汇合度永远达不到100%，对于这种类型的细胞，细胞达到或者接近最大密度的时候，就需传代。接触抑制型细胞（比如3T3）需要在细胞长满之前传代以避免产生细胞长满后接触抑制后产生性状的改变。悬浮型的细胞必须在细胞达到最大饱和密度之前传代，悬浮细胞传代时只需稀释至合适的密度，让细胞有充足的营养恢复到对数生长期。如果仅仅是简单的换液，而且细胞数量不减少，细胞将会快速耗尽营养而死亡；如果细胞稀释到最低密度之下，细胞将会进入停滞期而不增殖或者死亡。不同的悬浮细胞的最大饱和密度和传代的间隔与比例是不同的，所以，培养悬浮细胞要每日观察。

7、培养悬浮细胞，如何更换培养基？

如果空间足够，只需添加适量的新鲜培养基，这是培养悬浮细胞时更换培养基首选的方法（少数细胞除外）；也可以通过离心（1000g/5min）去除旧的培养基后，用新鲜的培养基轻轻地重悬细胞，移入培养瓶。

8、如何处理对于生物安全性不清楚地肿瘤细胞株？
了解每株细胞可能产生的生物危害是很难的，但是强烈推荐，所有的人类和其他灵长类生物的细胞在能否预防HIV和肝炎病毒的实验条件下操作，所有的操作必须在垂直层流超净台内操作（推荐生物安全柜），操作过程中产生的废液和废仪器都要经过清洗、酸处理等处理后才能丢弃。

9、能否使用细胞说明书上不同的培养基来培养细胞？

产品目录或者细胞说明书上的推荐的培养基一般是细胞株的原始提供者推荐的培养基或者已经经过验证的对该细胞株最合适的培养基，细胞对未推荐的培养基也许会适应，也有可能不适应。对于更换培养基，应谨慎对待，更换培养基时，应留一瓶细胞使用推荐的培养基培养，留作种子。更换培养基有两种方法，最简单的方法是直接更换培养基，强制使细胞适应新的培养基；还有一种更温和的方法：传代细胞的时候分成细胞两瓶，第一瓶使用原来推荐的培养基，第二瓶使用50%原来推荐的培养基，50%新的培养基，之后仔细观察细胞的生长状态，如果第二瓶细胞生长状态不好，应立即停止更换培养基，如果第二瓶生长状态好，可以继续传代分瓶，一瓶使用50%原来推荐的培养基，50%新的培养基，另一瓶使用25%原来推荐的培养基，75%新的培养基，继续观察，如果细胞状态好，可以全部换成新鲜的培养基。

10、培养基是否要添加L-glutamine（L-谷氨酰胺）？

对于所有的哺乳类动物细胞而言，L-glutamine（L-谷氨酰胺）是一种必须氨基酸。现在，所有固体包装的培养基都含有L-glutamine，因为L-glutamine在溶液中不稳定，易分解，商品化的液体培养基不含L-glutamine，如果原来培养基中不含L-glutamine或者L-glutamine已经降解（已含有L-glutamine的培养基在4℃贮存两周以上时，还应重新加入原来量的L-glutamine），应在使用培养基之前加入适量的L-glutamine。各种培养基的L-glutamine的浓度是不同的，比如M199含有0.68mM的L-glutamine，DMEM含有4mM的L-glutamine。

11、为什么有些细胞需要丙酮酸钠？

丙酮酸是糖酵解途径中一个中间产物，也是EM（Embden Myerhoff）途径的第一步，所以培养基中添加的丙酮酸既可以作为能量的来源也可以为细胞的代谢提供碳骨架。对于某些特殊的细胞，丙酮酸对维持细胞的生存是必需的，丙酮酸对于某些细胞的繁殖和低血清浓度的增殖也是必不可少。培养基中的丙酮酸钠浓度一般是0.1mM，商品化的丙酮酸钠一般是10mM(100X)的溶液。