应用实例:
六、小鼠心脏微血管内皮细胞(植块法)
简述:约1月龄小鼠,麻醉固定后,开胸减去心脏,放入D-HANKS缓冲液中,冲洗两遍,去除大血管,左右心房及右心室和室间隔,保留左心室肌。去除内、外膜,剪碎心室肌至1mm3左右的小块儿,滴加1ml胎牛血清,均匀接种于10cm培养皿中,,放入37℃, 5% CO2培养箱中培养;4小时后,添加7.5ml含有20%FBS的高糖DMEM培养基,继续培养,约48小时后有细胞游离出。
七、家兔阴茎海绵体平滑肌细胞(消化后植块法)
简述:新鲜阴茎标本立刻在0 ~4 ℃Hanks 缓冲液及含少量DMEM 的液体中清洗,锋利刀片尽快切除皮肤、白膜、尿道及尿道海绵体等组织,将阴茎海绵体组织块移入含DMEM 培养液的培养皿, 把组织块切割成1 mm ×1 mm ×1 mm 碎屑块, 并移入无菌锥型管,加入Hanks 缓冲液冲洗, 去除粘附于组织块上的细菌, 再以25 ml 37 ℃预热的DMEM 培养液冲洗碎屑1 次。随后将组织碎屑放入6 孔、35 mm 的Nunclon 细胞培养皿, 每孔4 ~ 5块组织碎屑,使组织块贴壁, 每孔注入4 ml DMEM 培养液, 小心置入37 ℃、5 %CO2 、95 %空气的细胞培养箱。一般2~3天就有细胞游离出来。
八、大鼠心肌细胞(酶消化法)
简述:新生SD大鼠,取心室肌,0.1%胰酶,35℃消化15min,收取上清,重复这一步骤4-5次。前两次以血红细胞和成纤维类细胞为主,弃去,收取后几次的细胞,PBS洗涤后,L-DMDM培养基铺板,37℃ ,CO2培养箱培养;1h后,将未贴壁的细胞已知新培养皿中继续培养;24h后冲洗换液;
九、人主动脉瓣膜间质细胞(酶消化法)
简述:取材后,冷的PBS清洗三遍,0.25%胰酶消化5分钟,用细胞刮刮去表面的内皮层,PBS冲洗后,将瓣膜剪碎成0.5~1mm3的小块,2g/ml IV型胶原酶37℃消化2小时;70μm滤网滤去瓣膜残渣,1500rom离心5分钟。HANKS缓冲液清洗一遍,离心沉淀后加入H-DMED(含10%FBS),常规培养。
十、小鼠真皮成纤维细胞(植块法)
简述:小鼠脱颈处死后,75%乙醇浸泡5min,备皮,去背部皮肤约1cm2置于含双抗的PBS中,仔细剥离脂肪血管等多余组织,去除表皮,将真皮部分清洗后于培养皿内剪碎,加入适量胰酶,37℃消化1h;加入H-DMEM完全噢诶杨及终止反应,PBS清洗组织块后均匀铺于10cm培养皿内,加入5ml培养基放入培养箱内,24h后补充培养基至10ml,3-4天后可见有细胞游出。
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